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多肽的溶解和保存方法
建議先用少量肽測試最佳溶解方法,多肽完全溶解后,再加入溶液,稀釋到最終濃度。也就是說,先溶解,然后加入緩沖液。注意:總是在適當的溶劑中加入多肽攪拌,不能采用其他方法。凍干多肽的溶解。
多肽溶解中的主要問題是二次結構的形成。
雖然疏水肽鏈二次結構的形成更加明顯,但除了最短肽鏈,這種現象幾乎發(fā)生在所有肽鏈上,與極性無關。因此,溶解多肽的第一個原則是使用無菌蒸餾水或離子水(條件允許時使用無氧水)。
多肽溶液可能會遇到細菌降解。為了避免這種現象的發(fā)生,多肽應溶解在無菌蒸餾水中,或用0.45或0.2的濾膜過濾除菌。
包括Cys、Met、Trp的多肽特別容易氧化,應溶解在無氧水中。無氧水可通過注入惰性氣體(氮、氦、氬)減壓除氣獲得。
多肽不溶于純水時,超聲波處理有助于破碎粒子,提高溶解度。注意:超聲波處理會導致溶液發(fā)熱和多肽分解。
多肽中含有多個堿性氨基酸時,使用1~10%乙酸水溶液的疏水性非常強的多肽使用50%乙酸。
多肽中含有大量酸性氨基酸時,可以用1~10%氨溶液或乙酸乙基嗎?咖啡或重碳酸鹽等揮發(fā)性堿性緩沖液溶解。pH值應在分層前調整。
異丙醇和乙腈可溶解中等大小肽。肽上柱時,有機溶劑的量必須少。否則,會嚴重影響滯留時間。
多肽含Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳烴側鏈高度疏水,或中性肽時,DMF和DMSO等膜變性劑的使用有助于多肽的溶解。
a.高濃度膜變性劑通過破壞多肽的二次結構幫助溶解。
b.膜變性劑適用于多肽分析液的制備,但可能會干擾其生物活性的研究工作。
c.DMF是最佳變性劑(最高濃度達到30%),滴下多肽溶解。
d.反相層分析時,DMF與洗脫液的前峰一起流出,根據樣品量的多少,峰值可能很高。大多數肽在大量DMF流出后幾分鐘內流出,肽鏈小的話,洗脫過早,多肽的量就會下降。冷凍干燥多肽的保存。
所有標明保持冷凍干燥的產物都必須保存在冷凍條件下,最好保存在-20℃以下,保存在-10℃以下,很多肽可以維持幾年的活性。
使用冷凍產品時,在打開蓋子之前,瓶子和試管必須在裝有新鮮干燥劑的干燥箱內升到室溫。對于保存在-20℃的產品,這個過程需要一個小時以上,根據包裝的大小而不同。否則,瓶子打開時,水分進入,多肽凝縮,穩(wěn)定性下降。一旦開啟,應迅速稱重完畢,立即封閉,以免潮解,尤其是親水肽更應留意。多肽溶液的保存。
多肽溶液比干粉穩(wěn)定性差得多,為了取得最佳結果,遵循以下原則:
1.反復凍融會損害肽的活性,建議分裝成小包保存。解凍需要多少,使用后扔掉剩下的東西。
2.溶于pH5~7無菌緩沖液,儲存在-20℃。
3.包括Cys、Met、Try、Glu、Asp的多肽容易氧化,因此必須保存在無氧化劑的環(huán)境中。
4.細菌可分解多肽,貯藏前必須過濾除菌。
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