多肽的溶解和保存方法

建議先用少量肽測試最佳溶解方法，多肽完全溶解后，再加入溶液，稀釋到最終濃度。也就是說，先溶解，然后加入緩沖液。注意:總是在適當的溶劑中加入多肽攪拌，不能采用其他方法。凍干多肽的溶解。

多肽溶解中的主要問題是二次結構的形成。

雖然疏水肽鏈二次結構的形成更加明顯，但除了最短肽鏈，這種現象幾乎發(fā)生在所有肽鏈上，與極性無關。因此，溶解多肽的第一個原則是使用無菌蒸餾水或離子水(條件允許時使用無氧水)。

多肽溶液可能會遇到細菌降解。為了避免這種現象的發(fā)生，多肽應溶解在無菌蒸餾水中，或用0.45或0.2的濾膜過濾除菌。

包括Cys、Met、Trp的多肽特別容易氧化，應溶解在無氧水中。無氧水可通過注入惰性氣體(氮、氦、氬)減壓除氣獲得。

多肽不溶于純水時，超聲波處理有助于破碎粒子，提高溶解度。注意:超聲波處理會導致溶液發(fā)熱和多肽分解。

多肽中含有多個堿性氨基酸時，使用1~10%乙酸水溶液的疏水性非常強的多肽使用50%乙酸。

多肽中含有大量酸性氨基酸時，可以用1~10%氨溶液或乙酸乙基嗎？咖啡或重碳酸鹽等揮發(fā)性堿性緩沖液溶解。pH值應在分層前調整。

異丙醇和乙腈可溶解中等大小肽。肽上柱時，有機溶劑的量必須少。否則，會嚴重影響滯留時間。

多肽含Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳烴側鏈高度疏水，或中性肽時，DMF和DMSO等膜變性劑的使用有助于多肽的溶解。

a.高濃度膜變性劑通過破壞多肽的二次結構幫助溶解。

b.膜變性劑適用于多肽分析液的制備，但可能會干擾其生物活性的研究工作。

c.DMF是最佳變性劑(最高濃度達到30%)，滴下多肽溶解。

d.反相層分析時，DMF與洗脫液的前峰一起流出，根據樣品量的多少，峰值可能很高。大多數肽在大量DMF流出后幾分鐘內流出，肽鏈小的話，洗脫過早，多肽的量就會下降。冷凍干燥多肽的保存。

所有標明保持冷凍干燥的產物都必須保存在冷凍條件下，最好保存在-20℃以下，保存在-10℃以下，很多肽可以維持幾年的活性。

使用冷凍產品時，在打開蓋子之前，瓶子和試管必須在裝有新鮮干燥劑的干燥箱內升到室溫。對于保存在-20℃的產品，這個過程需要一個小時以上，根據包裝的大小而不同。否則，瓶子打開時，水分進入，多肽凝縮，穩(wěn)定性下降。一旦開啟，應迅速稱重完畢，立即封閉，以免潮解，尤其是親水肽更應留意。多肽溶液的保存。

多肽溶液比干粉穩(wěn)定性差得多，為了取得最佳結果，遵循以下原則：

1.反復凍融會損害肽的活性，建議分裝成小包保存。解凍需要多少，使用后扔掉剩下的東西。

2.溶于pH5~7無菌緩沖液，儲存在-20℃。

3.包括Cys、Met、Try、Glu、Asp的多肽容易氧化，因此必須保存在無氧化劑的環(huán)境中。

4.細菌可分解多肽，貯藏前必須過濾除菌。

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