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多肽是一類 繁雜 的生物大分子 ,由于每條多肽的序列的不一樣 ,因此不一樣的肽鏈在化學(xué) 和物理學(xué)特點(diǎn)上是不一樣的。在人工化學(xué)中一些多肽合成就很困難 ,有一些多肽盡管有機(jī)合成相對性非常容易,可是純化的情況下有困難 。
比如 :有一些多肽序列不溶于溶液 。
因而在純化時(shí),這種疏水肽只能 用非水溶劑來融解,或獨(dú)特的緩沖溶液融解 ;殊不知有一些溶劑或緩沖溶液很可能不宜運(yùn)用于細(xì)胞生物學(xué)試驗(yàn)系統(tǒng)軟件 。 這就出現(xiàn)就算多肽合成取得成功 ,可是 科學(xué)研究工作人員沒法應(yīng)用該多肽開展實(shí)驗(yàn) 。
對于多肽序列出現(xiàn)的一些 難題 ,下邊是固拓生物給出的小建議!
怎樣 改善 生成 有困難 的多肽 序列
1.
降低 序列 長短化學(xué) 合成多肽,肽的長短提升造成生成粗物質(zhì)純凈度 減少 。當(dāng)序列長短低于15個(gè)殘基 的情況下較非常容易獲得必須的多肽 。 當(dāng)肽鏈 長短 提升 到20個(gè)殘基 之上 時(shí),由于生成 全過程 中不良反應(yīng) 的累積 ,生成完畢 獲得恰當(dāng)物質(zhì)的量便是 一個(gè) 關(guān)鍵考慮到的難題 。
氨基酸殘基 數(shù)小于 20 得話 能獲得 更強(qiáng) 的結(jié)果 。
2.
降低 疏水 氨基酸殘基 數(shù)
多肽 序列 中疏水性碳水化合物 占大部分 時(shí),特別是在 在距C端 7-12個(gè)殘基 的地區(qū) ,經(jīng)常 是生成 難題 。 這一般 被覺得是生成 中產(chǎn)生 β伸縮 精彩片段 。 在這種序列中,把1個(gè)或好多個(gè) jí性殘基 換置 ,或是 在序列 中添加 Gly或Pro以開啟 肽構(gòu)造 會出現(xiàn) 協(xié)助 。
3.
降低 “困難 ”殘基有好幾個(gè) Cys、Met 、Arg、Try 殘基 一般 難以 生成 。Ser一般 可做為 Cys的非空氣氧化更換 。
改善 可溶性 的挑選
1.
更改 N端或C端針對 酸堿性 肽,杭州固拓生物公司強(qiáng)烈推薦乙?;?/span> (N端乙?;?/span> ,C端維持隨意羧基 ),以提升負(fù)電 。 而針對偏堿 肽,大家強(qiáng)烈推薦氨基化 (N端隨意羥基 ,C端氨基化 ),以提升正電。
2.
減少或延長序列
一些 序列帶有很多疏水碳水化合物 ,如Trp、Phe、Val、Ile、Leu、Met 、Tyr和Ala等,當(dāng)這種疏水殘基 超過50%一般 難以融解 。為了更好地提升肽的jí性,延長序列會出現(xiàn)協(xié)助 。 此外一種 挑選是根據(jù)降低疏水殘基的方式 減少肽鏈 的長短以提升 jí性。 此外 一種挑選是根據(jù)降低 疏水殘基的方式 減少肽鏈的長短以提升 jí性。
3.
添加可溶性殘基
針對 一些 肽鏈來講 ,再加上 一些 jí性碳水化合物能改善可溶性 。 給偏堿肽的N端或C端 再加上Lys-Lys。 假如不可以添加帶正電荷官能團(tuán) ,能夠將Ser-Gly-Ser加進(jìn) N端或C端 。 可是,肽鏈 的兩邊不可以更改時(shí),該方式則不行得通 。
4.
根據(jù) 換置 一個(gè)或好幾個(gè)殘基 更改序列肽鏈的可溶性可根據(jù)更改序列內(nèi)一些 殘基來改善 。 一般單獨(dú)殘基的更換 就能改善其疏水性,而這類更改 一般是比較傳統(tǒng)的,如用Gly替代 Ala。
5.
根據(jù) 選用 不一樣 “框架 ”來更改 序列假如可用某一 序列來制取很多長短 一樣的互相串連或重合的多肽合成 ,則可以用更改每個(gè)多肽起始點(diǎn)的方式來完成更改序列的目地 。
其原理是:在同一多肽的親水性和疏水殘基間造就新的更強(qiáng)的均衡,或?qū)?/span>同一多肽內(nèi)的“困難 ”殘基 (例如兩個(gè)Cys)放入2個(gè)不一樣的多肽而不是集于同一 分子結(jié)構(gòu)內(nèi)。
肽鏈 的可溶性可根據(jù)更改序列內(nèi)一些殘基來改善 。 一般單獨(dú)殘基的更換就能改善 其疏水性,而這類更改 一般是比較傳統(tǒng)的,如用Gly替代 Ala。
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