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定制合成 Custom synthesis
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雖然多肽合成的氨基酸組成分析方法較多,且趨向更靈敏、更精確、更簡(jiǎn)便、更快速,但還沒有一種方法可以單獨(dú)適用于所有氨基酸殘基的檢測(cè),并且很多因素如溫度、時(shí)間、水解試劑、水解方法及多肽合成樣品中添加劑等對(duì)水解程度均有影響。常用的水解方法作簡(jiǎn)要介紹如下:
01酸水溶解
酸性水解是應(yīng)用最為廣泛水解方法,可以使大多數(shù)氨基酸殘基完全水解,最通用的水解劑是6 mol/L HCI。
條件:6 mol/L HCI、真空、110℃.水解時(shí)間為20-24h。即可用于液相水解模式也可用于氣相水解模式。但在該條件下,天冬酰胺和谷氨酰胺分別被完全水解為天冬氨酸和谷氨酸,色氨酸則被完全破壞,半胱氨酸先用二硫代二丙酸、4一乙烯呲啶或碘代乙酸保護(hù)后水解方可測(cè)定,酷氨酸部分被水解液所破壞,絲氨酸和蘇氨酸被部分水解。有些脂肪族氨基酸殘基間的肽鍵難于裂解,可以通過延長(zhǎng)水解時(shí)間如水解92h甚至120h來解決。
02堿性水解
堿性水解一般選用NaOH和KOH作為水解劑。該水解方法是HCI水解的互補(bǔ)法。因?yàn)閴A水解時(shí),多數(shù)氨基酸遭到破壞或外消旋化,僅色氨酸是穩(wěn)定的。所以此法僅限于測(cè)定色氨酸。
03酶水解
用一組蛋白酶水解肽鏈,特別適用于對(duì)化學(xué)水解敏感的氨基酸如天冬酰胺和谷氨酰胺的測(cè)定。水解過程中氨基酸不發(fā)生消旋化,幾乎可以保持所有的組成氨基酸不被破壞。但是因?yàn)槊杆鈼l件溫和,對(duì)天冬酰胺、谷氨酰胺等皆無破壞作用,且反應(yīng)需要較長(zhǎng)的時(shí)間,水解不完全,酶本身也是蛋白質(zhì),對(duì)樣品的測(cè)定結(jié)果可能會(huì)有干擾。
微波輻射能水解,一般情況下190℃微波水解15分鐘肽類即可完全水解,導(dǎo)致完全水解的時(shí)間大大縮短。在微波輔助酸水解和微波輔助酶水解中,水解時(shí)間可從過去的幾十小時(shí)縮短到幾十分鐘。
總之,多肽合成藥物水解方式應(yīng)根據(jù)其產(chǎn)品的性質(zhì)、研究目的、可獲得的樣品量及少實(shí)驗(yàn)室的具體條件采取適宜的水解方法。
寫到最后:
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