液相色譜是一種分離分析技術，其特點是液體作為流動相，固定相可以有多種形式，如紙張、薄板和填充床。在色譜技術的發(fā)展過程中。為了區(qū)分各種方法，根據(jù)固定相的形式，如紙色譜、薄色譜和柱液相色譜。

液相色譜儀的要求

1.流動相必須用HPLC級試劑過濾除去顆粒雜質和其他物質(用0.45μm或更薄的膜過濾)。

2.流動相過濾后應使用超聲波脫氣，脫氣后應恢復到室溫。

3.不能使用純乙腈作為流動相，使單向閥粘住，導致泵不進液。

4.使用緩沖溶液時，樣品完成后，應立即用去離子水沖洗管道和柱子一小時，然后用甲醇（或甲醇水溶液）沖洗40分鐘以上，以充分沖洗離子。對于柱塞桿外部，樣品完成后必須用去離子水沖洗20毫升以上。

5.如果長時間不使用儀器，應取下柱子，用堵頭密封保存。注意柱子不要用純水保存，要用有機相(如甲醇等)。)，因為純水容易發(fā)霉。

6.每次樣品完成后，應用溶解樣品的溶劑清洗進樣器。

7.C18柱絕對不能進入蛋白質樣品、血樣、生物樣品。

8.堵塞導致壓力過大，按預柱→混合器中的過濾器→管道過濾器→單向閥檢查清洗。清洗方法:

①以異丙醇為溶劑沖洗；

②在異丙醇中間用超聲波清洗；

③用10%稀硝酸清洗；

9.氣泡會導致壓力不穩(wěn)定，重現(xiàn)性差，因此在使用過程中盡量避免氣泡。

10.如果進液管內沒有液體，則使用注射器吸液：通常在輸液前清洗流動相。

11.注意柱子的pH值范圍，不要注射強酸強堿樣品，特別是堿性樣品。

12.更換流動相時，先將吸濾頭部分放入燒杯中振動邊洗，再插入新的。

流動相中。更換無互溶性流動相時，用異丙醇過渡。

常見故障的確定和解決方法

(1)保留時間變化。

1.柱溫變化：柱溫恒定，必要時需配置恒溫箱。

2.等度與梯度之間未能充分平衡：流動相平衡柱至少為10倍。

3.緩沖液容量不足：使用25mmol/L的緩沖液。

4.柱污染：每日沖洗柱。

5.柱內條件變化：穩(wěn)定進樣條件，調節(jié)流動相。

6.柱快達壽命：采用保護柱。

（2）縮短保留時間。

1.增加流速：檢查泵，重新設置流速。

2.樣品超載：減少樣品量。

3.鍵合相流失：流動相pH值保持在3~7.5檢查柱的方向。

4.流動相組成變化：防止流動相蒸發(fā)或沉淀。

5.溫度增加：柱恒溫。

(3)延長保留時間。

1.流速下降：管道泄漏，更換泵密封圈，排除泵內氣泡。

2.硅膠柱上的活性點變化：用流動相改性劑，如加三乙胺，或用堿至鈍化柱。

3.鍵合相流失：同前（2）3。

4.流動相組成變化：同前（2）4。

5.降溫：同前（2）5。

(4)肩峰或分*

1.樣品體積過大：用流量配樣，總樣品體積小于第一峰的15%

2.樣品溶劑過強：使用較弱的樣品溶劑。

3.柱坍塌或形成短路通道：更換色譜柱，腐蝕性較弱。

4.柱內燒結不銹鋼失效：更換燒結不銹鋼，添加在線過濾器，過濾樣品。

5.進樣器損壞：更換進樣器轉子。

(五)鬼峰

1.進樣閥殘余峰：每次使用后用強溶劑清洗閥門，改進閥門和樣品的清洗。

2.樣品中未知物：處理樣品。

3.柱不平衡：重新平衡柱，用流動相作樣品溶劑（特別是離子對色譜）

4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜):每日新配，使用抗氧化劑。

5.水污染（反相）：通過變化平衡時間檢查水質，使用HPLC級水。

(6)基線噪聲。

1.氣泡(尖峰）流動相脫氣：加柱背壓。

2.污染(隨機噪聲):清洗柱，凈化樣品，使用HPLC級試劑。

3.檢測器燈連續(xù)噪聲：更換鱸燈。

4.電干擾（意外噪聲）：使用穩(wěn)壓電源，檢查干擾源（如水浴等）

5.檢測器內有氣泡：流動相脫氣，加柱背壓。

(7)峰拖尾。

1.柱超載：降低樣品量，增加柱直徑，采用高容量固定相。

2.峰值干擾：清潔樣品，調整流動相。

3.硅羥基：

加入三乙胺，用堿性鈍化柱增加緩沖液或鹽濃度，降低流動相PH值，鈍化樣品。

4.同前(4)4同前(4)4。

5.同前(4)35.同前(4)3。

6.死體積或柱外體積過大：

盡量減少連接點，適當調整所有連接點，盡量使用細內徑的連接管。

7.柱效下降：

低腐蝕條件，更換柱，使用保護柱。

(8)峰寬。

1.進樣體積過大：同（4）1。

2.在進樣閥中引起峰擴張L進樣前后排出氣泡，以減少擴散。

3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速度過慢：設定速率應大于每峰10點。

4.檢測器時間常數(shù)過大：設定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%

5.流動相粘度過高：提高柱溫，采用低粘度流動相。

6.檢測池體積過大：用小體積池，卸下熱交換器。

7.保留時間過長：等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫。

8.柱外體積過大：盡量減小連接管徑和長度。

9.樣品過載：進入小濃度小體積樣品。

  寫到最后：

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