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液相色譜儀注意事項
作者:固拓多肽合成公司    發(fā)布于:2022年04月15日
摘要:液相色譜是一種分離分析技術,其特點是液體作為流動相,固定相可以有多種形式,如紙張、薄板和填充床。在色譜技術的發(fā)展過程中。為了區(qū)分各種方法,根據(jù)固定相的形式,如紙色譜、薄色譜和柱液相色譜。液相色譜儀的要求1.流

液相色譜是一種分離分析技術,其特點是液體作為流動相,固定相可以有多種形式,如紙張、薄板和填充床。在色譜技術的發(fā)展過程中。為了區(qū)分各種方法,根據(jù)固定相的形式,如紙色譜、薄色譜和柱液相色譜。

液相色譜儀的要求

1.流動相必須用HPLC級試劑過濾除去顆粒雜質和其他物質(用0.45μm或更薄的膜過濾)。

2.流動相過濾后應使用超聲波脫氣,脫氣后應恢復到室溫。

3.不能使用純乙腈作為流動相,使單向閥粘住,導致泵不進液。

液相色譜儀注意事項

4.使用緩沖溶液時,樣品完成后,應立即用去離子水沖洗管道和柱子一小時,然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上,以充分沖洗離子。對于柱塞桿外部,樣品完成后必須用去離子水沖洗20毫升以上。

5.如果長時間不使用儀器,應取下柱子,用堵頭密封保存。注意柱子不要用純水保存,要用有機相(如甲醇等)。),因為純水容易發(fā)霉。

6.每次樣品完成后,應用溶解樣品的溶劑清洗進樣器。

7.C18柱絕對不能進入蛋白質樣品、血樣、生物樣品。

8.堵塞導致壓力過大,按預柱→混合器中的過濾器→管道過濾器→單向閥檢查清洗。清洗方法:

①以異丙醇為溶劑沖洗;

②在異丙醇中間用超聲波清洗;

③用10%稀硝酸清洗;

9.氣泡會導致壓力不穩(wěn)定,重現(xiàn)性差,因此在使用過程中盡量避免氣泡。

10.如果進液管內沒有液體,則使用注射器吸液:通常在輸液前清洗流動相。

11.注意柱子的pH值范圍,不要注射強酸強堿樣品,特別是堿性樣品。

12.更換流動相時,先將吸濾頭部分放入燒杯中振動邊洗,再插入新的。

流動相中。更換無互溶性流動相時,用異丙醇過渡。

常見故障的確定和解決方法

(1)保留時間變化。

1.柱溫變化:柱溫恒定,必要時需配置恒溫箱。

2.等度與梯度之間未能充分平衡:流動相平衡柱至少為10倍。

3.緩沖液容量不足:使用25mmol/L的緩沖液。

4.柱污染:每日沖洗柱。

5.柱內條件變化:穩(wěn)定進樣條件,調節(jié)流動相。

6.柱快達壽命:采用保護柱。

(2)縮短保留時間。

1.增加流速:檢查泵,重新設置流速。

2.樣品超載:減少樣品量。

3.鍵合相流失:流動相pH值保持在3~7.5檢查柱的方向。

4.流動相組成變化:防止流動相蒸發(fā)或沉淀。

5.溫度增加:柱恒溫。

(3)延長保留時間。

1.流速下降:管道泄漏,更換泵密封圈,排除泵內氣泡。

2.硅膠柱上的活性點變化:用流動相改性劑,如加三乙胺,或用堿至鈍化柱。

3.鍵合相流失:同前(2)3。

4.流動相組成變化:同前(2)4。

5.降溫:同前(2)5。

(4)肩峰或分*

1.樣品體積過大:用流量配樣,總樣品體積小于第一峰的15%

2.樣品溶劑過強:使用較弱的樣品溶劑。

3.柱坍塌或形成短路通道:更換色譜柱,腐蝕性較弱。

4.柱內燒結不銹鋼失效:更換燒結不銹鋼,添加在線過濾器,過濾樣品。

5.進樣器損壞:更換進樣器轉子。

(五)鬼峰

1.進樣閥殘余峰:每次使用后用強溶劑清洗閥門,改進閥門和樣品的清洗。

2.樣品中未知物:處理樣品。

3.柱不平衡:重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑(特別是離子對色譜)

4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜):每日新配,使用抗氧化劑。

5.水污染(反相):通過變化平衡時間檢查水質,使用HPLC級水。

(6)基線噪聲。

1.氣泡(尖峰)流動相脫氣:加柱背壓。

2.污染(隨機噪聲):清洗柱,凈化樣品,使用HPLC級試劑。

3.檢測器燈連續(xù)噪聲:更換鱸燈。

4.電干擾(意外噪聲):使用穩(wěn)壓電源,檢查干擾源(如水浴等)

5.檢測器內有氣泡:流動相脫氣,加柱背壓。

(7)峰拖尾。

1.柱超載:降低樣品量,增加柱直徑,采用高容量固定相。

2.峰值干擾:清潔樣品,調整流動相。

3.硅羥基:

加入三乙胺,用堿性鈍化柱增加緩沖液或鹽濃度,降低流動相PH值,鈍化樣品。

4.同前(4)4同前(4)4。

5.同前(4)35.同前(4)3。

6.死體積或柱外體積過大:

盡量減少連接點,適當調整所有連接點,盡量使用細內徑的連接管。

7.柱效下降:

低腐蝕條件,更換柱,使用保護柱。

(8)峰寬。

1.進樣體積過大:同(4)1。

2.在進樣閥中引起峰擴張L進樣前后排出氣泡,以減少擴散。

3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速度過慢:設定速率應大于每峰10點。

4.檢測器時間常數(shù)過大:設定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%

5.流動相粘度過高:提高柱溫,采用低粘度流動相。

6.檢測池體積過大:用小體積池,卸下熱交換器。

7.保留時間過長:等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫。

8.柱外體積過大:盡量減小連接管徑和長度。

9.樣品過載:進入小濃度小體積樣品。

  寫到最后:

杭州固拓生物科技有限公司定制多肽合成業(yè)務:藥物肽、臨床肽、訂書肽、淀粉肽、醛肽、環(huán)肽、二硫鍵搭橋多肽、穿膜肽、各種抗菌肽、美容肽、磷酸化肽、PEG肽、偶聯(lián)BSAKLH抗原肽、各類酸修飾多肽、各種胺類化合物修飾多肽(苯胺、異戊胺、二乙胺)、各類熒光標記肽(FITCFAM系列、DOTA、TAMRA系列、Cy系列)同位素肽等。

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