多肽合成的工作原理

Fmoc 和 t Boc是現(xiàn)如今多肽合成的首要辦法，由于 Fmoc 比 tBoc 具有更多的優(yōu)勢(shì)，因此讓大家比較認(rèn)可Fmoc 法。多肽合成是一個(gè)重復(fù)添加氨基酸的進(jìn)程，合成方向是從 C 端（羧基端）向 N 端（氨基端）進(jìn)行；從前多肽合成大多是在液相中進(jìn)行，而如今大多選用固相合成，這會(huì)大大降低每步商品提純的難度；合成柱和添加的氨基酸的側(cè)鏈必須預(yù)先被維護(hù)且羧基端是游離的，制藥在反響之前先用化學(xué)試劑活化它，就可以防止副反響的發(fā)作，

具體合成過(guò)程如下：

1、去維護(hù)：Fmoc 維護(hù)的柱子和單體有必要用一種堿性溶劑去除氨基的維護(hù)基團(tuán)。

2、激活和交聯(lián)：下一個(gè)氨基酸的羧基被一種激活劑所激活溶解，激活的單體與游離的氨基在交聯(lián)劑的作用下交聯(lián)，構(gòu)成肽鍵。

3 、循環(huán)：這兩步反響重復(fù)循環(huán)直到整條肽鏈合成結(jié)束。

4 、洗脫和脫維護(hù)：依據(jù)肽鏈所含的殘基不一樣，用不一樣的脫樹(shù)脂溶劑從柱上洗脫下來(lái)，其維護(hù)基團(tuán)被一種脫維護(hù)劑洗脫和脫維護(hù)。

多肽是復(fù)雜的大分子，每條序列在物理和化學(xué)特性上都是相同的，有些多肽雖然合成相對(duì)簡(jiǎn)單，但純化艱難；最常見(jiàn)的疑問(wèn)是很多肽不溶于水溶液，在純化中，這些疏水肽必須溶于非水溶劑中或特別的緩沖液，但這些溶劑或緩沖液可能不適合應(yīng)用于生物試驗(yàn)體系，導(dǎo)致研究人員無(wú)法運(yùn)用該多肽達(dá)到自己的意圖，建議可以通過(guò)下降肽鏈合成的難度和增強(qiáng)肽鏈的可溶性來(lái)改善此現(xiàn)象。

一、下降肽鏈合成的難度

1.削減序列長(zhǎng)度

在很多試驗(yàn)中，下降殘基數(shù)低于20 往往能得到非常好的試驗(yàn)成果，因?yàn)殡牡拈L(zhǎng)度添加會(huì)致使粗產(chǎn)品純度下降，當(dāng)肽鏈長(zhǎng)度添加到20個(gè)殘基以上時(shí)，就不會(huì)簡(jiǎn)單得到較高純度的初產(chǎn)品。

2.削減疏水性殘基數(shù)

疏水性殘基占據(jù)優(yōu)勢(shì)的肽，在距C端7-12個(gè)殘基的區(qū)域會(huì)導(dǎo)致合成艱難。一般是因?yàn)楹铣芍袠?gòu)成b折疊片從而發(fā)生不完全配對(duì)。用1個(gè)或幾個(gè)極性殘基置換 或參加Gly或Pro以翻開(kāi)肽構(gòu)造會(huì)有幫助。

3.削減“艱難”殘基

有多個(gè)Cys 、Met 、Arg 、Try 殘基一般難于合成。Ser一般可作為Cys的非氧化更換。

二、增強(qiáng)肽鏈的可溶性

1、改動(dòng)N端或C端

關(guān)于酸性肽可推薦乙?；蕴砑迂?fù)電荷，對(duì)于堿性肽推薦氨基化以添加正電荷。

2、縮短或加長(zhǎng)序列

某些序列富含很多疏水氨基酸，如Trp 、Phe、Val、Ile 、Tyr 和 Ala等 ，當(dāng)它們大于50%一般難于溶解。加長(zhǎng)序列或通過(guò)削減疏水殘基的辦法下降肽鏈的長(zhǎng)度都可以加肽的極性，肽鏈極性越高越溶于水。

3、參加可溶性殘基

關(guān)于某些肽鏈而言，加上一些極性氨基酸能改進(jìn)可溶性。例如給酸性肽的N端或C端加上Glu-Glu；給堿性肽的N端或C端加上Lys-Lys。但是肽鏈兩頭不能改動(dòng)時(shí)，該辦法不可行。

4、通過(guò)置換一個(gè)或多個(gè)殘基改動(dòng)序列

改動(dòng)序列內(nèi)某些殘基可以改進(jìn)肽鏈的可溶性。一般單個(gè)殘基的更換能夠明顯改進(jìn)其疏水性，而這種改動(dòng)一般是較為保存的，如用Gly替代Ala 。

寫(xiě)到最后:

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