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使用多肽的關(guān)鍵條件之一便是多肽的溶解性,各個(gè)氨基酸的物理特性都是不同的;如賴氨酸、組氨酸、精氨酸是親水性的,但亮氨酸、異亮氨酸、頡氨酸則是疏水性的。因?yàn)槠浣M成不同,各個(gè)多肽具有不同的溶解性。
1.我們合成的多肽溶解性如何?
多肽的溶解性及合適的溶劑我們難以精確推斷,更不能認(rèn)為是多肽合成的問題造成多肽難以溶解;最好的辦法是從多肽序列中判斷多肽的溶解性。
2.如何從多肽序列中判定多肽的溶解性?
(1)多肽中假如帶有高比例的疏水性很強(qiáng)的氨基酸如Leu,Val,Ile,Met,Phe 和 Trp,多肽很難與水性溶液溶解乃至根本不可能溶解。這種氨基酸不管是純化或合成,都有可能有問題。
(2)一般來說疏水性氨基酸的比例<50%,無法連續(xù)5個(gè)連續(xù)aa為疏水性,帶電荷的氨基酸的比例達(dá)到20%,可以通過在多肽的N或C短添加極性氨基酸來改善溶解性。
3.如何溶解多肽?
通常難以短時(shí)間選擇合適的溶劑,一般是先取一些試一試,在沒有選擇合適的溶劑前切忌全部溶解。
如何選擇合適的溶劑?
第一步設(shè)定酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH為-1,判斷多肽的電荷特定;堿性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2為+1,其他氨基酸的電荷為0。計(jì)算出凈電荷數(shù)。
①如果凈電荷數(shù)>0,多肽為堿性,用水溶解;如果不溶解或溶解性不大,加入醋酸(10%以上);如果多肽還不能溶解,加入少量 TFA(25ul)溶解,最后加入500ul水稀釋。
②如果凈電荷數(shù)<0,多肽為酸性,用水溶解;如果不溶解或溶解性不大,加入氨水(25ul)溶解,然后加入500ul水稀釋。
③如果凈電荷數(shù)=0,多肽為中性,一般需要用有機(jī)溶劑如乙腈,甲醇或異丙醇,DMSO等溶解。疏水性很大的多肽適合用尿素來溶解。
寫到最后:
杭州固拓生物科技有限公司定制多肽合成業(yè)務(wù):藥物肽、臨床肽、訂書肽、淀粉肽、醛肽、環(huán)肽、二硫鍵搭橋多肽、穿膜肽、各種抗菌肽、美容肽、磷酸化肽、PEG肽、偶聯(lián)BSA和KLH抗原肽、各類酸修飾多肽、各種胺類化合物修飾多肽(苯胺、異戊胺、二乙胺)、各類榮光標(biāo)記(FITC、FAM系列、DOTA、TAMRA系列、Cy系列)同位素肽等。
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